品 名: 重组蛋白A 琼脂糖凝胶FF
英文名: rProtein A NUPharose FF
目录号: NRPB01L、NRPB01S(预装柱)
规 格: 10 mL, 20 mL,50 mL, 100 mL,500 mL, 1 L,10 L, 1 mL预装柱,5 mL预装柱,特殊规格订制
运 输: 2 ~ 25℃,常压、避光
贮 存: 20%乙醇,2 ~ 8℃
保质期: 3 年
相关介绍:
Protein A是一种金黄色葡萄球菌细胞壁蛋白质,能特异性地与很多哺乳动物的IgG及少数IgM和IgA结合,主要是与免疫球蛋白重链的Fc区结合。3777金沙娱场城在线在天然Protein A的基础上,进行序列设计蛋白改造,结合自有琼脂糖凝胶基球NUPharose体系,开发出用于抗体纯化的Protein A系列亲和填料。
技术指标:
基质 | 4%交联琼脂糖凝胶 |
配基 | 重组蛋白A |
配基密度 | ≥ 6 mg/mL |
平均粒径 | ~90 μm |
最大流速 | 900 cm/h |
推荐流速 | 60~300 cm/h |
pH稳定性 | pH 3~10 |
耐反压 | 0.3 MPa |
动态结合载量 | ≥40 mg h-IgG/mL |
抗体与蛋白A、蛋白G的结合力:
种类 Species | 亚型 Antibody Class | 蛋白A Protein A | 蛋白G Protein G |
人 Human | IgG1 IgG2 IgG3 IgG4 IgM IgD IgA Fab | +++ +++ + +++ + - + + | +++ +++ +++ +++ - - - + |
小鼠 Mouse | IgG1 IgG2a IgG2b IgG3 IgM | + +++ +++ +++ - | ++ +++ +++ +++ - |
大鼠 Rat | IgG1 IgG2a IgG2b IgG2c | + - - +++ | ++ +++ + +++ |
牛 Cow | IgG1 IgG2 | + +++ | +++ +++ |
山羊 Goat | IgG1 IgG2 | + +++ | +++ +++ |
马 Horse | IgG(ab) IgG(c) IgG(T) | + + - | - - +++ |
兔Rabbit | IgG | +++ | +++ |
猪Pig | IgG | +++ | + |
狗Dog | IgG | +++ | + |
鸡Chicken | IgY | - | - |
注:-表示不结合;+表示微弱结合;++表示中等结合;+++表示很强结合。
应用举例:
结合缓冲液:20 mM磷酸缓冲液,150 mM NaCl,pH 7.4
洗脱缓冲液:0.1 M柠檬酸缓冲液,pH 4.0
中和缓冲液:1 M Tris缓冲液,pH 9.0
1)1 mL重组蛋白A琼脂糖凝胶预填柱用5 ~ 10个柱床体积的蒸馏水洗去保存液;
2)用结合缓冲液结合缓冲液平衡 5 ~ 10个柱床体积;
3)将5 mL兔多抗血清用结合缓冲液稀释到50 ml,0.45 μm滤膜过滤上样;
4)用结合缓冲液再洗 5 ~ 10个柱床体积;
5)用洗脱缓冲液洗脱抗体,收集洗脱峰,并用中和缓冲液调节其pH至中性;
6)每次使用后用3 ~ 5个柱床体积的0.1 M 柠檬酸缓冲液(pH 3.0)再生清洗;
7)SDS-PAGE(图1)电泳分析洗脱下来的兔多抗纯度在95%以上。
图 1
注意事项:
1)预填柱使用简易方便,在没有仪器设备的条件下也可以完成纯化任务。
2)样品洗脱后一般pH很低,应立即用碱性中和缓冲液(如1 M Tris缓冲液,pH 9.0)将收集到的抗体溶液中和到中性,或在收集容器中事先装5% ~ 20%、pH 7 ~ 9的缓冲液(如1 M Tris-HCl或1 M 磷酸缓冲液),以利于维持抗体的生物活性,避免抗体失活。
3)使用时保证柱子和缓冲液的温度一致,避免柱床内产生气泡,影响纯化效果,如果已经产生气泡,可以自行重装柱子。
4)通常(每次)目标样品洗脱后应继续用0.1 M柠檬酸缓冲液(pH 2 ~ 3)洗3 ~ 5个柱体积,然后用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上,作简易再生。
5)使用数次后应进行在位清洗,建议用0.1% Triton X-100 37℃洗1 ~ 3个柱体积(10 ~ 30 min),立即用平衡缓冲液清洗5个柱体积以上;或70%乙醇洗5个柱体积以上(可保持4 ~ 16 h),再用平衡缓冲液清洗5柱体积以上。在位清洗能去除强疏水性蛋白质和脂类,恢复柱子的载量和流速。
导购指南
中文名 | 英文简称 | 货号 | 规格 | 产品描述 |
重力预装柱 | ||||
重组蛋白A琼脂糖凝胶FF重力预装柱 | ProA NUPharose FF pre-packed column | NRPB01S-Z11 | 1*1mL | 1支*1ml |
NRPB01S-Z41 | 4*1mL | 4支*1ml | ||
NRPB01S-Z15 | 1*5mL | 1支*5mL | ||
NRPB01S-Z25 | 2*5mL | 2支*5mL | ||
AKTA中压预装柱 | ||||
重组蛋白A琼脂糖凝胶FF中压预装柱 | ProA NUPharose FF pre-packed column | NRPB01S-Y11 | 1*1mL | 1支*1ml |
NRPB01S-Y41 | 4*1mL | 4支*1ml | ||
NRPB01S-Y15 | 1*5mL | 1支*5mL | ||
NRPB01S-Y25 | 2*5mL | 2支*5mL | ||
填料 | ||||
重组蛋白A琼脂糖凝胶FF | ProA NUPharose FF | NRPB01L-10 | 10mL | 1瓶*10ml |
NRPB01L-20 | 20mL | 1瓶*20ml | ||
NRPB01L-100 | 100mL | 1瓶*100ml | ||
NRPB01L-500 | 500ml | 1瓶*500ml | ||
注:3777金沙娱场城在线填料体积为实际琼脂糖凝胶体积 |